生物安全實驗室潔凈等級劃分標準

華銳凈化 / 2020-08-26 07:39:00 / 閱讀次

生物安全實驗室潔凈等級劃分標準生物安全實驗室潔凈等級劃分標準

生物安全實驗室潔凈等級劃分標準

潔凈室（區）的檢測

本文闡述了潔凈室（區）的檢測。對潔凈室（區）級別參數塵粒最大允許數、微生物最大允數、換氣次數、照度、壓差、溫度和相對濕度進行了實際檢測方面的歸納和總結。

獸藥GMP是指獸藥生產質量管理規范，是獸藥生產、質量管理的制度和基本準則。獸藥GMP對于潔凈室（區）的空調凈化系統等硬件要求非常嚴格，潔凈級別劃分的規定亦十分明確。潔凈室（區）的潔凈級別主要用塵粒最大允許數、微生物最大允許數和換氣次數3個參數來劃分，同時對照度、壓差、溫度和相對濕度等參數也作出了具體的指導和規定。這些參數能對（區）的級別作出相應合理的、科學的驗證和監測。

下面主要闡述這些參數具體的檢測。

生物安全實驗室

一、潔凈室（區）塵粒

塵粒是指一般尺寸為0.001μm～1000μm的固態和液態物質或兩者的混合物。塵粒檢測主要采用儀器光散射法，即空氣中的懸浮粒子在光的照射下產生光散射現象，散射光的強度與粒子的表面積成正比。檢測時，先確認空調凈化系統是否處于正常運行狀態，換氣次數或風速、壓差能否達到要求。然后按人流和物流的規定進入潔凈室（區）進行動態或靜態檢測，并測量潔凈室（區）的面積和容積，確定采樣點的數目、位置和采樣量。檢測要點見表1。

塵粒采樣時還需注意：1.在確認儀器計數穩定后方可開始連續讀數。2.采樣管必須干凈，嚴禁滲漏。3.采樣管的長度應根據儀器的允許長度。除另有規定外，長度不得大于1.5m。4.計數器采樣口和儀器工作位置應處在同一氣壓和溫度下，以免產生測量誤差。5.須按照儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定，以保證測試數據的可靠性。6.對于單向流，儀器采樣口的朝向應正對氣流方向，對于非單向流，采樣口宜向上。7.布置采樣點時，應避開回風口。8.采樣時，測試人員應在采樣口下風側。

表1：潔凈室（區）塵粒檢測要點

參數指標	懸浮粒子
檢測依據	JGJ71－90[1]、GB/T 16292-1996[2]
檢測條件	1.風速或換氣次數和靜壓差達到級別要求，溫、濕度須達到規定的要求。 2.對單向流，測試應在凈化空調系統正常運行時間≥10min后開始。 3.對非單向流，測試應在凈化空調系統正常運行時間≥30 min后開始。
采樣點位置	1．采樣點一般在離地面0.8m高度的水平面上均勻布置。 2．采樣點多于5點時，也可以在離地面0.8m～１.5m高度的區域內分層布置，但每層不少于5點。
最少采樣點數目和次數	1．對任何潔凈室（區），采樣點的數目≥2個，總采樣次數≥5次。每個采樣點的采樣次數可以＞1次，且不同采樣點的采樣次數可以不同。 2．最少采樣點數目可查表2。
采樣量	最小采樣量見表3。
結果報告	以檢測區域的某個采樣點的最大平均粒子濃度和全部采樣點粒子濃度平均值的95%置信上限進行報告。

表2：潔凈室（區）塵粒檢測的最少采樣點數

面積m2	潔凈度級別
面積m2	100	10 000	100000或300000
<10	2～3	2	2
≥10～<20	4	2	2
≥20～<40	8	2	2
≥40～<100	16	4	2
≥100～<200	40	10	3
≥200～<400	80	20	6
≥400～<1000	160	40	13
≥1 000～<2 000	400	100	32
2 000	800	200	63

表3 潔凈室（區）塵粒檢測的最小采樣量

潔凈度級別	采樣量，L/次
潔凈度級別	≥0.5μm	≥5μm
100	5.66	—
10 000	2.83	8.5
100 000或300 000	2.83	8.5

二、潔凈室（區）微生物

潔凈室（區）微生物可檢測沉降菌或浮游菌。沉降菌檢測是通過自然沉降原理，收集空氣中的生物粒子于培養基平皿中，經若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數，以平板培養皿中的菌落數來判定潔凈環境內的活微生物數，并以此來評定潔凈室（區）的潔凈度。浮游菌的檢測是采用計數濃度法，即通過收集懸浮在空氣中生物粒子于專門的培養基，經若干時間，在適宜的生長條件下其繁殖到可見的菌落進行計數，從而判定潔凈環境內單位體積空氣中的活微生物數，以此來評定潔凈室（區）的潔凈度。

實際檢測浮游菌和沉降菌時，先確認潔凈室（區）的檢測條件能否達到級別要求。達到要求后，測試人員和檢測儀器等按潔凈室（區）的進出規定（如穿戴符合環境級別的工作服、紫外照射、儀器外體消毒等）進出潔凈室（區），測試人員先測量測試區域的面積和體積，確定采樣次數和采樣點。浮游菌確定采樣量后按儀器操作規程操作，把空氣中懸浮的微生物采集到肉湯瓊脂培養基上。沉降菌確定采樣時間后直接把培養基裸露在空氣中，讓空氣中的微生物自動降落在肉湯瓊脂培養基上。采樣要點見表4～7。采集完的培養基需在30℃～35℃培養箱中培養，時間≥48h。同時選定不少于3只培養基作空白對照培養。

微生物檢測時需注意：

1.檢測前應仔細檢查每個培養皿的質量，不能使用有變質、破損或污染的培養基和培養皿。

2.采取一切措施防止采樣管的污染和其他人為對樣本的污染。

3.對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。

4.由于細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落或培養基沉淀物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。

5.若在本實驗室以外的環境中進行檢測，則培養基在整個運輸過程中必須對溫度進行控制，培養基需放在含有冰塊的、消毒過的運輸箱內，溫度控制在0℃～4℃，并在記錄中記錄運輸溫度。

表4 潔凈室（區）浮游菌的檢測要點

參數指標	浮游菌
檢測依據	JGJ71－90、GB/T16293-1996[3]
檢測條件	1.風速或換氣次數和靜壓差達到級別要求，溫、濕度須達到規定的要求。 2.浮游菌測試前，被測試潔凈室（區）已經過消毒。 3．對單向流，如100級凈化房間及層流工作臺，測試應在凈化空調系統正常運行≥10min后開始。 4．對非單向流，如10 000級，100 000級以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統正常運行≥30 min后開始。
采樣點位置	1．測點位置離地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。 2．送風口測點位置離開送風面30cm左右。 3．可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點。
采樣點數目和次數	浮游菌測試的最少采樣點數目分為日常監測及環境驗證兩種情況，見表5。每個采樣點一般采樣一次。 1）對每個100級潔凈操作區域（如層流罩、層流工作臺），可在離藥物敞開口處30cm處設測點，每班一次。 2）對每個10 000級潔凈工作區域（如藥物開口工作區），可在工作面處設測點，每班一次。
采樣量	采樣量根據日常監測及環境驗證確定，每次最小采樣量見表6。
結果報告	以檢測區域的浮游菌最大菌落濃度（個/m3）進行報告。

表5 潔凈室（區）浮游菌檢測的采樣點數目

面積 m2	潔凈度級別
	100		10 000		100 000或300 000
	驗證	監測	驗證	監測	驗證	監測
<10	2～3	1	2	1	2	—
≥10～<20	4	2	2	1	2	—
≥20～<40	8	3	2	1	2	—
≥40～<100	16	4	4	1	2	—
≥100～<200	40	—	10	—	3	—
≥200～<400	80	—	20	—	6	—
400	160	—	40	—	13	—
注：1）表1中的面積，對于100級的單向流潔凈室（包括層流工作臺），指的是送風口表面積，對于10 000級，100 000級，300 000級的非單向流潔凈室，指的是房間面積。 2）日常監測的采樣點數目由生產工藝的關鍵操作點來確定。

表6 潔凈室（區）浮游菌檢測的最小采樣量

潔凈度級別	采樣量，L/次
潔凈度級別	日常監測	環境驗證
100級	600	1 000
10 000級	400	500
100 000級	0	100
300 000級	0	100

表7 潔凈室（區）沉降菌的檢測要點

參數指標	沉降菌
檢測依據	JGJ71－90、GB/T16294-1996[4]
檢測條件	同浮游菌。
采樣點位置	1．工作區采樣點的位置離地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。 2．可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加采樣點。
采樣點數目	沉降法的最少采樣點數可按表8確定。
采樣量	應滿足最少培養皿數，見表9。
結果報告	以檢測區域的最大菌落數（個/皿）進行報告。

表8 潔凈室（區）沉降菌檢測的最少采樣點數目

面積m2	潔凈度級別
面積m2	100	10 000	100 000或300 000
<10	2～3	2	2
≥～<20	4	2	2
≥～<40	8	2	2
≥40～<100	16	4	2
≥100～<200	40	10	3
≥200～<400	80	20	6
≥400～<1000	160	40	13
≥1 000～<2 000	400	100	32
2000	800	200	63
注：表中的面積，對于單向流潔凈室，指的是送風面面積；對非單向流潔凈室，是指的房間面積。

表9 潔凈室（區）沉降菌檢測的最少培養皿數

潔凈度級別	所需φ90mm培養皿數（以沉降0.5h計）
100	14
10 000	2
100 000或300 000	2

三、潔凈室（區）風速和換氣次數

風速和換氣次數檢測依據為JGJ71-90。風速、換氣次數必須首先進行檢測，潔凈室的各項效果必須是在設計的風速風量條件下獲得的。以風口截面平均風速乘以風口凈截面面積確定風量。潔凈室（區）換氣次數以送風量除以潔凈室（區）的體積來確定，從而判定潔凈室（區）是否符合級別規定，百級潔凈室（區）只需以最低風速進行判定。檢測要點見表10。檢測時，需注意檢測風速宜用檢測架固定風速儀以避免人體干擾，不得不手持風速儀檢測時，手臂應伸直至最長位置，使人體遠離測頭。

表10 潔凈室（區）風速、換氣次數的檢測要點

參數指標	風速、換氣次數
檢測條件	風機運行正常，系統中各部件安裝正確，無障礙（如過濾器無被堵、擋），所有閥門固定在一定的開啟位置上，并且必須實際測量被測風口、風管尺寸以及被測潔凈室（區）的體積。
采樣點位置	1．單向流潔凈室：檢測截面上測點間距不應大于２ｍ。其中垂直單向流：檢測截面取距地面０.８ｍ的水平截面；水平單向流（層流）潔凈室：取距送風面０.５ｍ的垂直截面。 2．亂流潔凈室：根據風口形式可選用輔助風管，即用硬質板材做成與風口內截面相同、長度等于２倍風口邊長的直管段，連接于過濾器風口外部，在輔助風管出口平面上取采樣點。
采樣點次數	1．單向流潔凈室：測點數應不少于１０個，均勻布置。 2．亂流潔凈室：按最少測點數不少于６點均勻布置測點。
結果報告	百級潔凈室（區）檢測結果報告以檢測區域風速的最低數值進行報告。百級以上的潔凈室（區）檢測結果報告以檢測區域的總風量數值或換氣次數的實際值進行報告。

四、潔凈室（區）壓差、照度、噪聲、溫度和濕度

這些參數指標主要以JGJ71-90為檢測依據，以各檢測儀的原理進行檢測。檢測要點見表11～14。

檢測需注意:1.噪聲檢測時，檢測人員不得發出任何有礙于結果測定的聲音（如摩擦聲，說話聲等）。2.照度檢測時，儀器的采樣探頭不能有雜物污染，采樣時應在明亮處，不能在物體的陰影處采樣，且潔凈室（區）照度只測定除特殊局部照明之外的一般照明。

表11 潔凈室（區）靜壓差的檢測要點

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參數指標	靜壓差
檢測條件	風速或換氣次數達到級別要求，穿戴符合環境級別的工作服，在所有門關閉時進行。
采樣點位置	從潔凈室（區）最里面的房間依次向外測定，檢測高度一般可為0.8m。
采樣點次數	≥1次。

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